ערכת TIANcombi DNA Lyse & Det PCR

טיהור מהיר של DNA מחומרים שונים לאיתור PCR.

ערכת ה- TIANcombi DNA Lyse & Det PCR מאמצת עיצוב אריזה ייחודי הכולל את כל הריאגנטים להכנת DNA גנומית מהירה והגברת PCR. זה ישים לטיהור ה- DNA הגנום של שלב אחד מדגימות שונות (רקמות צמחים, זרעים, רקמות של בעלי חיים, דם, שמרים וחיידקים) והגברה וזיהוי PCR שלאחר מכן. חלבון, RNA והסרת מטבוליטים משניים אחרים, מיצוי ממס אורגני כמו גם שלבי משקעי האתנול אינם נחוצים בכל תהליך הטיהור, מה שהופך את הפעולה לפשוטה ומהירה. איכות המוצר יציבה ואמינה.

ה- 2 × Det PCR MasterMix המסופק על ידי ערכה זו הוא מגיב PCR תואם במיוחד שיכול להגביר ביעילות ובאופן ספציפי DNA ללא צורך בהסרת זיהומים כגון חלבונים. מגיב זה מכיל פולימראז של Taq DNA, dNTPs, MgCl₂, חיץ, כמו גם המשפר, האופטימיזציה והמייצב לתגובת PCR. יישום המגיב הופך את תגובת ה- PCR למהירה, פשוטה, רגישה, ספציפית ויציבה. לכן, ערכה זו מתאימה במיוחד להקרנה בתפוקה גבוהה.

חתול. לא	גודל האריזה
4992527	20 μl × 50 rxn
4992528	20 μl × 200 rxn

שלח לנו מייל

פרטי המוצר

דוגמא ניסיונית

שאלות נפוצות

תגי מוצר

מאפיינים

■ פשוט ומהיר: ניתן לחלץ DNA מרקמות שונות תוך 5 דקות ללא צורך בטחינת חנקן נוזלי.
■ יישומים רחבים: ישים לעלי צמחים, זרעים, רקמות מן החי, דגימות דם (דם טרי, נוגדי קרישה, קרישי דם, כתמי דם מיובשים וכו '), שמרים וחיידקים.
■ תאימות חזקה: מגיב ה- PCR מתאים להגברה של ה- DNA המופק ממקורות דגימה שונים.

יישומים

■ זיהוי גנים: בחירה אידיאלית לגילוי גנים בקנה מידה גדול.

הערות חשובות

■ בדגימות המכילות רמות גבוהות של פנולים, כגון עלי כותנה, כמות הקלט של המדגם צריכה להיות פחות מ -0.4 מ"ג, אחרת תגובת ה- PCR תושפע.

ניתן להתאים את כל המוצרים עבור ODM/OEM. לפרטים,אנא לחץ על שירות מותאם אישית (ODM/OEM)

קודם: ערכת חילוץ והגברה של GMO

הַבָּא: ערכת PCR Blood Direct

	DNA חולץ מ -5 מ"ג מהעלים והזרעים של תירס, חיטה, אורז, פולי סויה וכותנה, בהתאמה. ה- DNA הוגבר על ידי PCR באמצעות פריימרים ספציפיים. 6 μl DNA מתוך 20 μl eluents הכוללים הועמסו לנתיב. 1: גנום שליטה חיובית; 2: השאר דגימות; 3: דגימות זרע; 4: NTC; 5: פריימרים D2000
	M: TIANGEN Marker D2000; 1: שליטה חיובית; 2-7: מספר כתמי הדם היבש על נייר הסינון הוא 1-6 בהתאמה; 8: שליטה שלילית. החבטה בגודל 3 מ"מ שימשה כדי לקחת את כתמי הדם היבשים מנייר הסינון כחומר לבדיקת החילוץ. 6 μl DNA מתוך 20 μl eluents הכוללים הועמסו לנתיב.
	M: TIANGEN Marker D2000; 1: שליטה חיובית (DNA גנומי שימש כתבנית); 2-7: כמות הדם המתווספת היא 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl ו- 60 μl, בהתאמה; 8-13: כמות הדם המתווספת היא 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl ו- 60 μl, בהתאמה; 14: NTC. 6 μl DNA מתוך 20 μl eluents הכולל הועמס על ג'ל agarose.

ש: אין להקות הגברה

תבנית A-1

■ התבנית מכילה זיהומי חלבון או מעכבי טאק וכו '—— לטהר תבנית DNA, להסיר זיהומי חלבון או לחלץ DNA תבנית עם ערכות טיהור.

■ גילוי התבנית אינו שלם —— הגדילו את טמפרטורת הדנטורציה כראוי והאריכו את זמן ההפנמה.

■ התדרדרות התבנית —— הכינו מחדש את התבנית.

A-2 פריימר

■ איכות ירודה של פריימרים —— סינתזה מחדש של הפריימר.

■ הפחתת פריימר —— חלקו את הפריימרים בריכוז גבוה לנפח קטן לשימור. הימנע מהקפאה והפשרה מרובות או קריו-שימור לטווח ארוך של 4 מעלות צלזיוס.

■ תכנון לא נכון של פריימרים (למשל אורך פריימר לא מספיק, דימר נוצר בין פריימרים וכו ') -עיצוב פריימרים מחדש (הימנע מהיווצרות דימר פריימר ומבנה משני)

A-3 Mg²⁺ריכוז

■ מג²⁺ הריכוז נמוך מדי —— הגדל כראוי Mg²⁺ריכוז: ייעל את ה- Mg²⁺ ריכוז על ידי סדרה של תגובות מ- 1 מ"מ עד 3 מ"מ עם מרווח של 0.5 מ"מ כדי לקבוע את ה- Mg האופטימלי²⁺ ריכוז לכל תבנית ופריימר.

A-4 טמפרטורת חישול

■ טמפרטורת החישול הגבוהה משפיעה על כריכת הפריימר והתבנית. —— הפחית את טמפרטורת החישול וייעל את המצב בשיפוע של 2 ° C.

זמן הארכה A-5

■ זמן הארכה קצר —— הגדל את זמן ההארכה.

ש: חיובי שווא

תופעות: דגימות שליליות מציגות גם את להקות רצף היעד.

זיהום A-1 של PCR

■ זיהום צולב של רצף המטרה או מוצרי ההגברה —— בזהירות לא להעביר את המדגם המכיל את רצף המטרות בדגימה השלילית או לשפוך אותן מהצינור הצנטריפוגות. יש לבצע חיטוי של הריאגנטים או הציוד כדי לסלק חומצות גרעין קיימות, ולקבוע את קיומה של זיהום באמצעות ניסויי בקרה שליליים.

■ זיהום מגיב —— סלק את הריאגנטים ושמור בטמפרטורה נמוכה.

A-2 פרייםr

■ מג²⁺ הריכוז נמוך מדי —— הגדל כראוי Mg²⁺ ריכוז: ייעל את ה- Mg²⁺ ריכוז על ידי סדרה של תגובות מ- 1 מ"מ עד 3 מ"מ עם מרווח של 0.5 מ"מ כדי לקבוע את ה- Mg האופטימלי²⁺ ריכוז לכל תבנית ופריימר.

■ עיצוב פריימר לא תקין, ולרצף המטרה יש הומולוגיה עם רצף שאינו מטרה. —— פרימרים בעיצוב מחדש.

ש: הגברה לא ספציפית

תופעות: להקות ההגברה PCR אינן תואמות את הגודל הצפוי, גדול או קטן, או שלפעמים מתרחשות גם להקות הגברה ספציפיות וגם להקות הגברה לא ספציפיות.

A-1 פריימר

■ סגוליות פריימר ירודה

—— פריימר בעיצוב מחדש.

■ ריכוז הפריימר גבוה מדי —— הגדל כראוי את טמפרטורת הדנטורציה והארך את זמן הדנטורציה.

A-2 Mg²⁺ ריכוז

■ ה- Mg²⁺ הריכוז גבוה מדי —— הפחת כראוי את ריכוז Mg2+: ייעל את ה- Mg²⁺ ריכוז על ידי סדרה של תגובות מ- 1 מ"מ עד 3 מ"מ עם מרווח של 0.5 מ"מ כדי לקבוע את ה- Mg האופטימלי²⁺ ריכוז לכל תבנית ופריימר.

A-3 פולימראז תרמו-יציב

■ כמות אנזים מוגזמת —— הפחיתו את כמות האנזים כראוי במרווחים של 0.5 U.

A-4 טמפרטורת חישול

■ טמפרטורת החישול נמוכה מדי —— הגדילו כראוי את טמפרטורת החישול או אמצו את שיטת החישול הדו-שלבית

A-5 מחזורי PCR

■ יותר מדי מחזורי PCR —— צמצם את מספר מחזורי ה- PCR.

ש: להקות מדבקות או מריחות

A-1 פריימר—— ספציפיות ירודה —— עיצוב מחדש של הפריימר, שנה את המיקום והאורך של הפריימר כדי לשפר את הספציפיות שלו; או לבצע PCR מקונן.

A-2 תבנית DNA

—— התבנית אינה טהורה —— לטהר את התבנית או לחלץ DNA בעזרת ערכות טיהור.

A-3 Mg²⁺ ריכוז

—— מג²⁺ הריכוז גבוה מדי —— הפחת כראוי של Mg²⁺ ריכוז: ייעל את ה- Mg²⁺ ריכוז על ידי סדרה של תגובות מ- 1 מ"מ עד 3 מ"מ עם מרווח של 0.5 מ"מ כדי לקבוע את ה- Mg האופטימלי²⁺ ריכוז לכל תבנית ופריימר.

A-4 dNTP

—— ריכוז ה- dNTP גבוה מדי —— הפחית את ריכוז ה- dNTP כראוי

A-5 טמפרטורת חישול

—— טמפרטורת חישול נמוכה מדי —— הגדילו כראוי את טמפרטורת החישול

A-6 מחזורים

—— יותר מדי מחזורים —— אופטימיזציה של מספר המחזורים

ש: כמה DNA צריך להוסיף במערכת תגובת PCR של 50 μl?

ש: איך מגבירים שברים ארוכים?

השלב הראשון הוא לבחור את הפולימראז המתאים. פולימראז רגיל של Taq לא יכול לקרוא הגהה בגלל חוסר בפעילות אקסנוקלאז 3'-5 ', ואי התאמה תפחית מאוד את יעילות ההרחבה של שברים. לכן, פולימראז רגיל של Taq לא יכול להגביר ביעילות שברי מטרה הגדולים מ -5 קילו. יש לבחור Taq פולימראז עם שינוי מיוחד או פולימראז אחר באיכות גבוהה כדי לשפר את יעילות ההרחבה ולענות על הצרכים של הגברה של שברים ארוכים. בנוסף, הגברה של שברים ארוכים דורשת גם התאמה מקבילה של עיצוב הפריימר, זמן דנטורציה, זמן הארכה, pH מאגר וכו 'בדרך כלל, פריימרים עם 18-24 bp יכולים להוביל לתשואה טובה יותר. על מנת למנוע נזק לתבנית, יש להפחית את זמן הדנטורציה ב 94 ° C ל -30 שניות או פחות לכל מחזור, והזמן לעלות טמפרטורה ל 94 ° C לפני ההגברה צריך להיות פחות מדקה אחת. יתר על כן, הגדרת טמפרטורת ההרחבה על כ 68 ° C ועיצוב זמן ההארכה לפי הקצב של 1 קילו־בייט/דקה יכולים להבטיח הגברה יעילה של שברים ארוכים.

ש: כיצד לשפר את נאמנות ההגברה של PCR?

ניתן להפחית את שיעור השגיאות של הגברה PCR באמצעות פולימראזות שונות של DNA בנאמנות גבוהה. בין כל הפולימראזות של Taq DNA שנמצאו עד כה, לאנזים Pfu יש שיעור השגיאות הנמוך ביותר והנאמנות הגבוהה ביותר (ראו טבלה מצורפת). בנוסף לבחירת האנזים, חוקרים יכולים להפחית עוד יותר את שיעור המוטציות של ה- PCR על ידי ייעול תנאי התגובה, כולל ייעול הרכב החיץ, ריכוז פולימראז יציב ואופטימיזציה של מספר מחזור ה- PCR.

כתוב את הודעתך כאן ושלח אלינו