ערכת חילוץ והגברה של GMO

מתאים במיוחד לחילוץ GMO Crop וזיהוי PCR מהונדס.

ערכת החילוץ וההגברה של גידול GMO פותחה במיוחד לאיתור PCR של גידולי GMO. מאגר התמוגה הייחודי הכלול בחלק א 'של הערכה יכול לייסס באופן ספציפי את רקמות הגידולים העיקריים - חיטה, תירס, אורז, כותנה וסויה, לשחרור רכיבים קשורים כגון חומצות גרעין וחלבונים. מיצוי הפנול/כלורופורם בשילוב ה- RNase הספציפי יכול לטהר DNA גנומי בעל טוהר גבוה ללא זיהומים כגון RNA, חלבון ויוני מתכת. ניתן ליישם את ה- DNA המטוהר באיתור PCR שלאחר מכן. חלק ב 'של הערכה הוא מערכת תגובת PCR פשוטה דו-רכיבית המכילה 2 × GMO PCR Buffer ו- GMO DNA Polymerase. פולימראז DNA GMO הוא פולימראז תרמו -יציב המשתנה עם נוגדנים. מאגר ה- PCR 2 × GMO מכיל רכיבים שונים כגון MgCl2, dNTPs, מייצב תגובת PCR, אופטימיזציה ומשפר בריכוז של 2 × GMO. יש לו את היתרונות של פעולה מהירה ופשוטה, רגישות גבוהה, ספציפיות חזקה, יציבות טובה וכו '. ניתן להשתמש בו בשילוב עם חלק א' לגילוי PCR מהונדס GMO.

חתול. לא גודל האריזה
4992905 200 rxn

 

 


פרטי המוצר

דוגמא ניסיונית

שאלות נפוצות

תגי מוצר

מאפיינים

■ תחולה רחבה: ערכה זו יכולה לחלץ DNA גנומי באיכות גבוהה מחמישה גידולי GMO עיקריים.
■ פשוט ומהיר: ניתן להשלים את חילוץ ה- DNA הגנומי של גידול GMO תוך שעתיים. אין צורך בצנטריפוגות מקוררות גדולות, דרישות נמוכות למכשירים וציוד. מתאים לחילוץ DNA גנומי מהיר של גידולי GMO בכל הרמות של מוסדות מחקר.
■ יעילות וספציפיות גבוהה: המאגר הייחודי של פולימראז Taq הנוגדני שנוגד מבטיח הגברה יעילה של פולימראז, שהיא יותר ספציפית מפולימראז Taq רגיל.

יישומים

הערכה יכולה לחלץ DNA גנומי באיכות גבוהה מגידולי GMO עיקריים כגון חיטה, תירס, אורז, כותנה ופולי סויה, ולבצע זיהוי PCR מהונדס על גידולי GMO.

ניתן להתאים את כל המוצרים עבור ODM/OEM. לפרטים,אנא לחץ על שירות מותאם אישית (ODM/OEM)


  • קודם:
  • הַבָּא:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example מיצוי DNA גנומי
    מיצוי DNA גנומי בוצע על 100 מ"ג עלים של אורז, תירס, פולי סויה, כותנה וחיטה, בהתאמה. הניסוי חזר על עצמו פעמיים. 3 μl DNA מתוך 100 μl eluents הכוללים הועמסו לנתיב.
    ריכוז ג'ל האגרוז היה 2%. האלקטרופורזה בוצעה תחת 6 V/ס"מ למשך 20 דקות.
    D15000: TIANGEN D15000 סמן DNA.
    Experimental Example זיהוי PCR
    DNA גנומי של אורז, תירס, פולי סויה, כותנה וחיטה הוגבר, בהתאמה. הניסוי חזר על עצמו פעמיים. 6 μl ממערכת התגובה הכוללת 20 μl הועמסה לכל נתיב.
    ריכוז ג'ל האגרוז היה 2%. האלקטרופורזה בוצעה תחת 6 V/ס"מ למשך 20 דקות.
    D15000: TIANGEN D15000 סמן DNA.
    ש: אין להקות הגברה

    תבנית A-1

    ■ התבנית מכילה זיהומי חלבון או מעכבי טאק וכו '—— לטהר תבנית DNA, להסיר זיהומי חלבון או לחלץ DNA תבנית עם ערכות טיהור.

    ■ גילוי התבנית אינו שלם —— הגדילו את טמפרטורת הדנטורציה כראוי והאריכו את זמן ההפנמה.

    ■ התדרדרות התבנית —— הכינו מחדש את התבנית.

    A-2 פריימר

    ■ איכות ירודה של פריימרים —— סינתזה מחדש של הפריימר.

    ■ הפחתת פריימר —— חלקו את הפריימרים בריכוז גבוה לנפח קטן לשימור. הימנע מהקפאה והפשרה מרובות או קריו-שימור לטווח ארוך של 4 מעלות צלזיוס.

    ■ תכנון לא נכון של פריימרים (למשל אורך פריימר לא מספיק, דימר נוצר בין פריימרים וכו ') -עיצוב פריימרים מחדש (הימנע מהיווצרות דימר פריימר ומבנה משני)

    A-3 Mg2+ריכוז

    ■ מג2+ הריכוז נמוך מדי —— הגדל כראוי Mg2+ ריכוז: ייעל את ה- Mg2+ ריכוז על ידי סדרה של תגובות מ- 1 מ"מ עד 3 מ"מ עם מרווח של 0.5 מ"מ כדי לקבוע את ה- Mg האופטימלי2+ ריכוז לכל תבנית ופריימר.

    A-4 טמפרטורת חישול

    ■ טמפרטורת החישול הגבוהה משפיעה על כריכת הפריימר והתבנית. —— הפחית את טמפרטורת החישול וייעל את המצב בשיפוע של 2 ° C.

    זמן הארכה A-5

    ■ זמן הארכה קצר —— הגדל את זמן ההארכה.

    ש: חיובי שווא

    תופעות: דגימות שליליות מציגות גם את להקות רצף היעד.

    זיהום A-1 של PCR

    ■ זיהום צולב של רצף המטרה או מוצרי ההגברה —— בזהירות לא להעביר את המדגם המכיל את רצף המטרות בדגימה השלילית או לשפוך אותן מהצינור הצנטריפוגות. יש לבצע חיטוי של הריאגנטים או הציוד כדי לסלק חומצות גרעין קיימות, ולקבוע את קיומה של זיהום באמצעות ניסויי בקרה שליליים.

    ■ זיהום מגיב —— סלק את הריאגנטים ושמור בטמפרטורה נמוכה.

    A-2 פרייםr

    ■ מג2+ הריכוז נמוך מדי —— הגדל כראוי Mg2+ ריכוז: ייעל את ה- Mg2+ ריכוז על ידי סדרה של תגובות מ- 1 מ"מ עד 3 מ"מ עם מרווח של 0.5 מ"מ כדי לקבוע את ה- Mg האופטימלי2+ ריכוז לכל תבנית ופריימר.

    ■ עיצוב פריימר לא תקין, ולרצף המטרה יש הומולוגיה עם רצף שאינו מטרה. —— פרימרים בעיצוב מחדש.

    ש: הגברה לא ספציפית

    תופעות: להקות ההגברה PCR אינן תואמות את הגודל הצפוי, גדול או קטן, או שלפעמים מתרחשות גם להקות הגברה ספציפיות וגם להקות הגברה לא ספציפיות.

    A-1 פריימר

    ■ סגוליות פריימר ירודה

    —— פריימר בעיצוב מחדש.

    ■ ריכוז הפריימר גבוה מדי —— הגדל כראוי את טמפרטורת הדנטורציה והארך את זמן הדנטורציה.

    A-2 Mg2+ ריכוז

    ■ ה- Mg2+ הריכוז גבוה מדי —— הפחת כראוי את ריכוז Mg2+: ייעל את ה- Mg2+ ריכוז על ידי סדרה של תגובות מ- 1 מ"מ עד 3 מ"מ עם מרווח של 0.5 מ"מ כדי לקבוע את ה- Mg האופטימלי2+ ריכוז לכל תבנית ופריימר.

    A-3 פולימראז תרמו-יציב

    ■ כמות אנזים מוגזמת —— הפחיתו את כמות האנזים כראוי במרווחים של 0.5 U.

    A-4 טמפרטורת חישול

    ■ טמפרטורת החישול נמוכה מדי —— הגדילו כראוי את טמפרטורת החישול או אמצו את שיטת החישול הדו-שלבית

    A-5 מחזורי PCR

    ■ יותר מדי מחזורי PCR —— צמצם את מספר מחזורי ה- PCR.

    ש: להקות מדבקות או מריחות

    A-1 פריימר—— ספציפיות ירודה —— עיצוב מחדש של הפריימר, שנה את המיקום והאורך של הפריימר כדי לשפר את הספציפיות שלו; או לבצע PCR מקונן.

    A-2 תבנית DNA

    —— התבנית אינה טהורה —— לטהר את התבנית או לחלץ DNA בעזרת ערכות טיהור.

    A-3 Mg2+ ריכוז

    —— מג2+ הריכוז גבוה מדי —— הפחת כראוי של Mg2+ ריכוז: ייעל את ה- Mg2+ ריכוז על ידי סדרה של תגובות מ- 1 מ"מ עד 3 מ"מ עם מרווח של 0.5 מ"מ כדי לקבוע את ה- Mg האופטימלי2+ ריכוז לכל תבנית ופריימר.

    A-4 dNTP

    —— ריכוז ה- dNTP גבוה מדי —— הפחית את ריכוז ה- dNTP כראוי

    A-5 טמפרטורת חישול

    —— טמפרטורת חישול נמוכה מדי —— הגדילו כראוי את טמפרטורת החישול

    A-6 מחזורים

    —— יותר מדי מחזורים —— אופטימיזציה של מספר המחזורים

    ש: כמה DNA צריך להוסיף במערכת תגובת PCR של 50 μl?
    ytry
    ש: איך מגבירים שברים ארוכים?

    השלב הראשון הוא לבחור את הפולימראז המתאים. פולימראז רגיל של Taq לא יכול לקרוא הגהה בגלל חוסר בפעילות אקסנוקלאז 3'-5 ', ואי התאמה תפחית מאוד את יעילות ההרחבה של שברים. לכן, פולימראז רגיל של Taq לא יכול להגביר ביעילות שברי מטרה הגדולים מ -5 קילו. יש לבחור Taq פולימראז עם שינוי מיוחד או פולימראז אחר באיכות גבוהה כדי לשפר את יעילות ההרחבה ולענות על הצרכים של הגברה של שברים ארוכים. בנוסף, הגברה של שברים ארוכים דורשת גם התאמה מקבילה של עיצוב הפריימר, זמן דנטורציה, זמן הארכה, pH מאגר וכו 'בדרך כלל, פריימרים עם 18-24 bp יכולים להוביל לתשואה טובה יותר. על מנת למנוע נזק לתבנית, יש להפחית את זמן הדנטורציה ב 94 ° C ל -30 שניות או פחות לכל מחזור, והזמן לעלות טמפרטורה ל 94 ° C לפני ההגברה צריך להיות פחות מדקה אחת. יתר על כן, הגדרת טמפרטורת ההרחבה על כ 68 ° C ועיצוב זמן ההארכה לפי הקצב של 1 קילו־בייט/דקה יכולים להבטיח הגברה יעילה של שברים ארוכים.

    ש: כיצד לשפר את נאמנות ההגברה של PCR?

    ניתן להפחית את שיעור השגיאות של הגברה PCR באמצעות פולימראזות שונות של DNA בנאמנות גבוהה. בין כל הפולימראזות של Taq DNA שנמצאו עד כה, לאנזים Pfu יש שיעור השגיאות הנמוך ביותר והנאמנות הגבוהה ביותר (ראו טבלה מצורפת). בנוסף לבחירת האנזים, חוקרים יכולים להפחית עוד יותר את שיעור המוטציות של ה- PCR על ידי ייעול תנאי התגובה, כולל ייעול הרכב החיץ, ריכוז פולימראז יציב ואופטימיזציה של מספר מחזור ה- PCR.

    כתוב את הודעתך כאן ושלח אלינו